抗酸菌染色：オーラミン･ローダミン法

抗酸菌を染める染色として【オーラミン･ローダミン法】がある。

これは抗酸菌が蛍光色素に親和性があることを利用した方法で、チールネルゼン法やファイト法などで染まり難い菌も染め出される。弱拡大で広範囲の検索が容易であり、他の抗酸菌染色と比較して検出率の高い優れた方法である。

抗酸菌以外にも細胞残滓や組織間隙にも染まる事があるので、必要に応じて強拡大で桿菌であることを確認する必要がある。

＜対物レンズx20倍での像＞

オレンジに染まっているのが抗酸菌である。オーラミン・ローダミン法の方が断然見やすく、多く染まっている。

Fite法 x20

オーラミン・ローダミン法x20

＜オーラミン単染色とオーラミン･ローダミン染色との違い＞

オーラミン単染色でも同様の効果が得られる。しかし好みもあるが、オーラミン･ローダミン重染色のほうが蛍光が橙色鮮明で見易いと思われる。

オーラミン単染色法（x20）

オーラミン・ローダミン重染色（x20）

染色方法

１）脱パラ・キシレン

２）流水水洗

３）0.1%ローダミンB液　1分

４）余分な色素を流して、水洗せずに0.1%石炭酸オーラミン液　15分

５）水洗

６）1%塩酸アルコールで分別

７）水洗

８）レフレルのメチレンブルー（軽く青）

９）水洗

10）乾燥・流動パラフィンで封入

* 0.1%ローダミンB液

ローダミンB　　0.1g

蒸留水　　　　　100ml

* 0.1%石炭酸オーラミン液

オーラミンO　　0.1g

蒸留水　　　　　95ml

石炭酸　　　　　5ml

*レフレルのメチレンブルー

①メチレンブルー原液

メチレンブルー　1.4g

蒸留水　　　　　　100ml

②使用液

メチレンブルー原液（①）30ml

1%KOH水溶液　　　　　　1ml

蒸留水　　　　　　　　　100ml

執筆日：2009/01/28

執筆者：神戸大学医学部附属病院病理診断科　伊藤智雄